分析型液相色譜(HPLC)是一種與氣液色譜相對(duì)應(yīng)的液相色譜技術(shù),用于分離、鑒定、定量和純化復(fù)雜化合物。它主要通過(guò)不同樣品分子與固定相之間作用力的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。
分析型液相色譜的基本原理是利用柱子內(nèi)填充物(固定相)和溶劑(流動(dòng)相),讓樣品在固定相中進(jìn)行吸附、分配和離子交換等反應(yīng),實(shí)現(xiàn)各個(gè)組分的分離和純化。樣品分離的速度和效率取決于填料的物理化學(xué)性質(zhì),樣品的化學(xué)結(jié)構(gòu),流動(dòng)相的成分和流速等因素。隨著科技進(jìn)步,現(xiàn)代的HPLC具有分辨率高、分離能力強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、耗時(shí)短等特點(diǎn)。
分析型液相色譜在化學(xué)、生物醫(yī)藥、食品、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。在藥物領(lǐng)域,HPLC可用于提取中藥,分離純化化合物等。在環(huán)境領(lǐng)域,HPLC可用于分析食品、水源和大氣污染物等。在化學(xué)分析領(lǐng)域,HPLC可用于毒理學(xué)、分析化學(xué)和制藥學(xué)等。
根據(jù)分析型液相色譜的應(yīng)用對(duì)象、分離效率和速度,可以選擇不同種類的柱子、填料和流量。不同柱子的選擇應(yīng)該是根據(jù)樣品的性質(zhì)、背景干擾程度、分離反應(yīng)的性質(zhì)等綜合考慮。對(duì)于極性較小的樣品,常用C18柱;對(duì)于極性較大的化合物,常用C8柱。填料可以有多種選擇,如化學(xué)變性聚合物、硅膠、甲基硅膠、碳鏈等。流量通常與柱子大小和填料性質(zhì)有關(guān)。通常情況下,流量越大,分離效率越低;流量越小,分離效率越高,速度越慢。
在選取分析型液相色譜參數(shù)時(shí)要考慮幾個(gè)方面,如樣品的純度和濃度、溶劑成分、最大峰的數(shù)量、流量和波長(zhǎng)選擇等。在決定它何時(shí)應(yīng)用于分析樣品類型時(shí),人們也要考慮所需分離的組分類別、需要識(shí)別的特定組分類別等因素。